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基因提取
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应用简介
DNA是遗传信息的载体,是最重要的生物信息分子,是分子生物学研究的主要对象,因此DNA取方面的工作,那就根本谈不上进行分子生物学方面的实验。
在DNA提取过程中应做到:1、根据不同研究需要,保证结构的相应完整性;2、尽量排除其它大分子成分的污染(蛋白质、多糖及RNA等);3、保证提取样品中不含对酶有抑制作用的有机溶剂及高浓度的金属离子。下面结合不同的研究对象列出几种相应的DNA提取方法。
技术原理
原核生物的基因是连续不间隔的,直接用限制酶从DNA切取就可得到目的基因,再PCR扩增后就能得到大量目的基因。
真核细胞核基因组DNA编码的基因,以及感染真核细胞的DNA病毒和反转录病毒基因组编码基因,统称真核基因。真核基因调取是指通以动物组织或细胞为模板,提取获得cDNA或gDNA,从中扩增基因或启动子等功能元件。也可将基因片段或者各功能元件片段亚克隆至各载体。
实验方法
1、原核流程
送样注意事宜
1、DNA样品保存在TEbuffer或超纯水中,并置于1.5mL或2.0mL的灭菌不黏管内,并用封口膜封好。管上用记号笔或标签清晰、准确地标记样品名称。
2、为确保实验的顺利,建议样品备份1~2份,避免部分样品降解导致重新取材、制备或送样,耽误时间。
3、所有样品必须附带一份《样品信息单》,详细填写信息单上所要求的各项样品信息,包括样品编号、样品状态(DNA液体、干粉或组织叶片、血液、肌肉等)、是否可以用完,如果是DNA液体,还需标注浓度、体积、制备时间、电泳图等,随同样品一起寄出,并将电子版发送至销售人员邮箱。
4、尽量使用干冰运输,夏季运输需要适当增加用量;