摘要：

骨肉瘤（OS）是一种最常见的原发性骨肿瘤，主要发生于年轻人，来源于原始骨形成的间充质。OS发生在复杂的肿瘤微环境（TME）中，由microRNAs（miRNAs）调控的细胞功能可能影响OS细胞与周围TME之间的通信。因此，miRNAs被认为是癌症的潜在治疗靶点，研究的目标之一是准确定义miRNAs的特定特征，这可以反映特定肿瘤的表型，如OS。通过NGS方法，我们之前在OS中发现了miRNAs的特定分子谱，并发现了8个新的miRNAs。其中，我们加深了我们对现在更名为miR-CT3的第五个候选基因的认识。与人原代成骨细胞和健康骨细胞相比，OS细胞中MiR-CT3的表达较低。通过TargetScan，预测VEGF-A为miR-CT3的潜在生物学靶点，荧光素酶检测证实了这一点。我们发现，miR-CT3在两种OS细胞系SAOS-2和MG-63中的强制表达，降低了VEGF-AmRNA和蛋白的表达，抑制了肿瘤血管生成。强制表达miR-CT3也减少了OS细胞的迁移和侵袭，软琼脂集落形成实验证实了这一点。有趣的是，我们发现miR-CT3可以诱导p38MAP激酶通路的激活，并调节上皮-间充质转化(EMT)蛋白，特别是降低波形蛋白的表达。总之，我们的研究强调了miR-CT3在OS细胞中调节肿瘤血管生成和进展中的新作用，也与EMT蛋白的调节有关。

简介

骨肉瘤(OS)是一种原发性骨组织恶性肿瘤，其发病率呈双峰年龄分布，影响儿童和青少年（初始高峰在12-14岁）和成人（60岁以上）。OS治疗（手术和化学疗法）的改进以及对OS发病机制分子机制的理解的进步共同提高了长期存活率。迄今为止，对OS的大部分理解都是基于解剖学和组织学原理，而临床决策与后者密切相关。另一个非常重要的问题是微转移，估计有超过一半的患者在初次检查时没有肺转移。因此，仍然有必要发现用于OS诊断、预测治疗反应和疾病进展的新型生物标志物。

利用NGS方法，本文作者发现并分析了8种新miRNA在OS癌细胞和一组人体组织中的表达。生物信息学分析表明，这8种新型miRNA似乎与人类恶性肿瘤的发病机制和进展有关并将进行进一步的研究，以了解它们作为治疗靶点或分子生物标志物的潜在用途。

在目前的研究中，作者将注意力集中在miR-CT3上（pre-miR序列chr8:129022790..129022852，成熟序列UGCGCAGUGGCAGUAUCGUAGCC），预计可能调节VEGF-A信号通路和其他与致癌。值得注意的是，VEGF-A被认为是OS患者无肿瘤生存的不良预后标志物，表明其在抗VEGF治疗中的潜在作用。最近，生物信息学分析重建了所有与OS相关的miRNA及其靶标的相互作用网络，有趣的是，VEGF-A在OS的子网络中产生了部分枢纽基因节点。除了VEGF-A因子外，该研究还强调了几种已知的与转移相关的microRNA的参与。在这里，作者提供的证据表明miR-CT3在迁移/侵袭机制和调节上皮间质转化(EMT)相关蛋白中起重要作用。因此，本研究的假设是miR-CT3可以在调节肿瘤血管生成和OS侵袭中发挥潜在的抗转移作用。

方法与结果

本研究通过体外实验研究发现，新型miR-CT3和靶基因预测（见图一）；miR-CT3的强制表达下调VEGF-A（见图二）；miR-CT3的强制表达损害血管形成和OS细胞在血管内皮上的粘附（见图三）；miR-CT3的强制表达似乎不调节细胞增殖和凋亡（见图四）。MiR-CT3减少OS细胞的迁移和侵袭能力（见图五）；MiR-CT3调节与迁移相关的蛋白质的表达（见图六）；转移性患者样本中的MiR-CT3表达（见图七）；

（图一）

（图二）

（图三）

（图四）

（图五）

（图六）

（图七）

结论

目前的研究旨在阐明新型microRNA miR-CT3在OS细胞中的作用；获得的数据表明miR-CT3是一种潜在的肿瘤抑制miRNA，特别影响肿瘤血管生成和转移机制。

我们假设miR-CT3的一种可能的分子机制，它可能（1）通过与VEGF-A直接连接来控制肿瘤血管生成，也通过 MAPK/ERK 通路的失活，以及（2）抵消OS的迁移和侵袭细胞，通过抑制一些EMT蛋白，如Vimentin，通过激活p38MAPK 途径（见图八）。逐步地，我们将继续对通过NGS分析在OS细胞中鉴定的其他新miRNA进行新的体外研究，以鉴定与OS转移相关的新 miRNA 特征。

（图八）

文章出自：细胞实验    想了解更多请关注：http://www.do-gene.cn/