CHIP实验是一种广泛应用于基因调控、转录因子结合和染色质修饰等领域的实验技术。通过该技术，可以鉴定和定量特定蛋白质与染色质上的结合位点，进一步了解基因表达调控的机制。以下是CHIP实验的详细步骤：

CHIP实验操作详细步骤，免疫共沉淀实验详解

第一步、细胞的甲醛交联与超声破碎。

（1）取出细胞，加入甲醛，使得甲醛的终浓度为1%。

（2）37摄氏度孵育10min。

（3）终止交联。

（4）吸尽培养基，用冰冷的PBS清洗细胞2次。

（5）细胞刮刀收集细胞于15ml离心管中。预冷后离心收集细胞。

（6）倒去上清。

（7）超声破碎。

第二步、除杂及抗体哺育

（1）超声破碎结束后，离心去除不溶物质。

（2）在100μl的超声破碎产物中，加入900μl ChIP Dilution Bufer 和20μl × PIC。再各加入60μl ProteinA Agarose/Salmon Sperm DNA。4°C颠转混匀1h。

（3）1h后，在4摄氏度静置10min沉淀，700rpm离心1min。

（4）取上清。各留取20μl做为input。一管中加入1μl抗体，另一管中则不加抗体。4°C颠转过夜。

第三步、检验超声破碎的效果

（1）取100μl超声破碎后产物，加入4μl 5M NaCl，65°C处理2h解交联。分出一半用酚/氯仿抽提。

（2）电泳检测超声效果。

第四步、免疫复合物的沉淀及清洗（第二天）

（1）孵育过夜后，每管中加入60μl ProteinA Agarose/Salmon Sperm DNA。4°C颠转2h。

（2）4°C静置10min后，离心除去上清。

（3）清洗沉淀复合物。清洗的步骤:加入溶液，在4°C颠转10min，4°C静置10min沉淀，700rpm离心1min，除去上清。

（4）清洗完毕后，开始洗脱。

（5）解交联:每管中加入20μl 5M NaCl（NaCl终浓度为0.2M）。混匀，65°C解交联过夜。

第五步、DNA样品的回收（第三天）

（1）解交联结束后，每管加入1μl RNAaseA(MBI) ，37°C孵育1h。

（2）每管加入10μl 0.5M EDTA，20μl 1M Tris.HCl（pH6.5），2μl 10mg/ml蛋白酶K。45°C处理2h。

（3）DNA片段的回收-omega胶回收试剂盒。最终的样品溶于100μl ddH2O。

文章出自：细胞实验外包    想了解更多请关注：http://www.do-gene.cn