🔎我们都知道，在Western Blot（WB）实验中，转膜是将电泳分离后的蛋白质从凝胶转移到膜上的关键步骤。如果转膜不成功，后续的抗体孵育和检测就都会受到影响，最终导致结果不准确或者没有信号，所以，快速判断转膜是否成功非常重要。 🔎那问题来了！在Western Blot（WB）实验中，我们如何有效判断转膜是否成功呢？ 🔎东极生物实验室建议，可以采取以下几种方法： 1️⃣使用预染Marker：转膜后，可以通过观察预染Marker在凝胶和膜上的分布来初步判断转膜效率，如果凝胶上的Marker几乎消失，而膜上有清晰的Marker条带，则表明转膜较为成功。这是比较直接的方法，因为预染Marker的颜色肉眼可见，不需要复杂步骤，我们更为推荐这个。 2️⃣丽春红染色：丽春红染色是一种快速的可逆的染色方法，可以暂时显示膜上的总蛋白。染色后的膜可以继续进行蛋白印记分析，因为丽春红不会固定蛋白质。操作方法也不难，只需要将膜浸泡在丽春红染液中，然后洗脱，可以看到红色条带，如果有条带说明蛋白质已经转移到膜上。但 东极生物实验室 需要提醒大家的是，丽春红染色可能灵敏度不高，特别是对于低丰度蛋白可能不明显，不过作为快速检测还是可行的。 3️⃣考马斯亮蓝染色：这种方法可以用来染色电转移后的凝胶，操作就是转膜结束后，将凝胶用考马斯亮蓝染色，观察是否还有蛋白质残留。如果凝胶中大部分条带消失或明显变淡，说明蛋白质已经转移到膜上。但这种方法需要染色和脱色步骤，可能需要较长时间，我们觉得可以在转膜后立即处理凝胶，作为后续确认。而且，虽然考马斯亮蓝染色虽然理论上是可逆的，但由于考马斯亮蓝染色中使用的醇和酸可能会在使用后将蛋白质样品固定在凝胶中，因此 东极生物实验室 提醒大家，染色后不宜进行蛋白质印迹分析。 🔎好了，在Western Blot（WB）实验中，有效判断转膜是否成功的方法就重点说这3个了，如果大家对Western Blot（WB）实验还有不明白的欢迎在评论区互相交流，共同学习，最后 东极实验室 祝大家科研之路一路畅通！！！

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