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划痕实验(细胞迁移)注意事项!
时间:2025-05-23 08:22:01点击量:207次
细胞迁移实验的话,就是在融合的单层细胞上造一个划痕,后面划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域,而我们则可以细胞迁移过程中在开始和定期捕获图像,通过测量不同时间点的划痕间距并计算差值,可对细胞的迁移能力做出判断。
虽然这个划痕实验(细胞迁移)看起来很简单,但是其实这个还挺考验操作人员的技术的,今天就和东极生物实验室一起来学习下划痕实验(细胞迁移)操作细节和一些注意事项吧~
划痕实验(细胞迁移)步骤:
1.划线:于六孔板底面,马克笔顺直尺画三条横线作为标记线。
2.种板:根据分组种板,细胞密度长推荐为5x105个/孔左右更佳。
3.划痕:待细胞长满后,用直尺比着,枪头垂直于孔板和画的标记线划两条垂线,使划痕与标记线相交。
4.清洗:弃去旧培养基,用PBS轻轻润洗2-3次,直到划下来的细胞冲洗干净。
5.加液:根据分组分别加入加药培养基或无血清培养基。
6.拍照观察:划痕、清洗、加液完成后,用显微镜拍不同倍数的照片,作为0h对照。放入37℃,5%CO2培养箱中培养。在所需时间点取出细胞,于显微镜下观察同一位置划痕宽度并拍照。
7.数据分析。
划痕实验(细胞迁移)注意事项:
1.所有工具,使用前务必照紫外消杀。
2.枪头画线之前,不要弃去原培养基,否则划下来的细胞团块会堆积在划痕边缘上堆积导致宽度不统一;并且,用枪头画线时,要用力均匀一致,避免宽度差别较大不利于结果分析的准确性。
3.一般拍照时间为0,2,4,6,8,10,12,16,24小时等选取,不推荐超过24h,因为这样会过度增殖造成实验假阳性结果。
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