一、DNA Marker降解

可能原因①：核酸酶污染

处理方法①：每次吸取时更换灭菌枪头，勿将电泳缓冲液带入管中；用后密闭 4°C保存

可能原因②：保存不当

处理方法②：4°C或-20°C保存，避免多次反复冻融；不可加热

二、DNA Marker无法正确分离

可能原因①：琼脂糖质量差

处理方法①：使用质量可靠的琼脂糖制胶

可能原因②：电泳缓冲液多次使用后失效

处理方法②：更换缓冲液

三、条带暗淡

可能原因①：核酸浓度过低

处理方法①：增加上样量

可能原因②：核酸降解

处理方法②：使用不含核酸酶的试剂和耗材制备样品

可能原因③：DNA条带被示踪染料掩盖

处理方法③：提高上样量；避免使用与目的片段迁移率相同的示踪染料

四、条带拖尾

可能原因①：样品溶解不彻底

处理方法①：上样前离心或者使用移液器充分混匀；或选择质量较高的上样缓冲液和电泳缓冲液

可能原因②：凝胶浓度太高，迁移困难

处理方法②：重新实验，降低凝胶浓度

五、点样孔荧光

可能原因①：DNA过量或未完全溶解，堵塞点样孔

处理方法①：调整DNA上样量，确保样品充分溶解

可能原因②：样品含有杂质（如蛋白质、多糖）或沉淀

处理方法②：纯化样品（如酚氯仿抽提、柱纯化）

六、条带模糊或弥散

可能原因①：电泳缓冲液多次使用后失效

处理方法①：更换缓冲液

可能原因②：核酸部分降解

处理方法②：使用不含核酸酶的试剂和耗材制备样品

可能原因③：核酸样品纯度差，含有DNA结合蛋白或高浓度的盐份

处理方法③：酚/仿抽提或乙醇沉淀去除蛋白、盐份等杂质

可能原因④：电压过低，电泳时间过长

处理方法④：根据凝胶大小和电泳缓冲液类型，使用适当的电压进行电泳

可能原因⑤：染色时间过长或拍照前放置过久，DNA条带弥散

处理方法⑤：电泳结束后及时观察、拍照

七、条带缺失

可能原因①：DNA条带分子量过大

处理方法①：使用脉冲凝胶电泳

可能原因②：分子量接近的DNA条带没有分开

处理方法②：选择适当的凝胶浓度进行电泳

可能原因③：电极插反，DNA走出凝胶

处理方法③：正确连接电极方向

可能原因④：电泳缓冲液使用不当

处理方法④：SD和TBE缓冲液适于较小分子量的DNA片段，大片段分子不能完全分离；TAE缓冲液不适于分离很小的DNA片段

可能原因⑤：电泳时间过长或电压过高，DNA走出凝胶

处理方法⑤：缩短电泳时间，调整电压

八、多条离散条带

可能原因①：核酸降解或形成聚合物

处理方法①：加热处理或重新制备样品

可能原因②：λDNA酶切Marker的cos位点复性

处理方法②：电泳前 65°C加热5分钟，冰上冷却5分钟以后再上样

可能原因③：相同分子量的DNA片段由于结构或序列的差异而有不同的迁移率

处理方法③：判断DNA分子是否有特殊结构，如缺口、超螺旋、二聚体等；富含AT碱基的DNA迁移率比同分子量富含GC碱基的DNA片段慢

可能原因④：梳子变形，点样孔不在同一水平线上

处理方法④：使用完好的梳子制胶

九、其他异常可能原因

可能原因①：不同样本的上样条件不同

处理方法①：使用相同的上样缓冲液，上样量尽可能接近

可能原因②：上样量过大或过小

处理方法②：选择合适大小的上样孔，样品应完全覆盖点样孔底部

可能原因③：核酸样品纯度差，含有DNA结合蛋白或高浓度的盐份

处理方法③：酚/仿抽提或乙醇沉淀去除蛋白、盐份等杂质

可能原因④：电泳缓冲液未完全浸没凝胶

处理方法④：上样和电泳时，确保缓冲液始终能完全覆盖凝胶

可能原因⑤：电压过高或电泳时间过长致使凝胶过热和DNA变性

处理方法⑤：根据凝胶大小和电泳缓冲液类型，使用适当的电压进行电泳

可能原因⑥：凝胶中加入EB造成染色不均

处理方法⑥：加入EB时充分混匀或电泳结束后再染色

可能原因⑦：凝胶中有气泡或污染物

处理方法⑦：使用纯水和洁净容器制胶；缓慢灌胶，并赶除气泡

可能原因⑧：点样孔质量差

处理方法⑧：待凝胶完全凝聚后再取出梳子

可能原因⑨：错误选择了低浓度凝胶

处理方法⑨：观察大片段用低浓度凝胶，观察小片段要用高浓度

可能原因⑩：琼脂糖质量不好

处理方法⑩：质量不好的琼脂糖分离小片段容易扩散，即使是使用高浓度凝胶加入EB时充分混匀或电泳结束后再染色

可能原因⑪：选择了不合适的电泳缓冲液

处理方法⑪：SD和TB 缓冲液适于分析较小分子量的DNA片段，大片段分子不能完全分离；TAE缓冲液不适于分离很小的DNA片段

实验外包    想了解更多请关注：http://www.do-gene.cn