一、苯酚-氯仿提取法（有机溶剂法）

【原理】

使用SDS（十二烷基硫酸钠）或蛋白酶K破坏细胞膜/核膜，释放DNA和蛋白质；加入苯酚-氯仿-异戊醇混合液使蛋白质变性（酚溶解蛋白质，氯仿增强相分离，异戊醇减少气泡）；离心后DNA保留在水相中，吸取水相，加入冷乙醇或异丙醇沉淀DNA，离心后获得DNA沉淀。

【优点】

l 成本低，适用性广

l 提取的DNA纯度高（适合PCR、Southern blot）

【缺点】

l 步骤繁琐，需多次离心和液相转移，易有人为误差

l 试剂有毒性（苯酚/氯仿）

l 易造成DNA断裂（长片段不适用）

【适用样本】

l 动物组织、血液（肝脏、肌肉、白细胞等）

l 细胞、细菌、真菌

二、盐析法（高盐沉淀法）

【原理】

使用裂解液（含SDS或TritonX-100）破坏细胞膜，释放DNA和蛋白质；加入高浓度盐溶液（如NaCl或醋酸钠）使蛋白质沉淀；离心后蛋白质沉淀，DNA和RNA保留在上清液中；再用冷乙醇或异丙醇沉淀DNA，离心后获得DNA沉淀。 

【优点】

l 操作简单，无需有机溶剂

l 成本低廉，适用性广

l 对DNA剪切力小，适合提取较长片段 

【缺点】

l 纯度较低（含多糖/盐残留），需后续纯化 

【适用样本】

l 植物组织（多糖多酚含量高）

l 细菌、真菌

l 动物组织、血液（白细胞、肝脏等）

l 法医样本（唾液、毛发等微量样本）

三、硅胶模柱法（离心柱法） 

【原理】

使用含蛋白酶K和离液盐（如盐酸胍、异硫氰酸胍）的裂解液破坏细胞结构，释放DNA；在高盐条件下，DNA的磷酸骨架与硅胶膜表面的硅羟基（Si-OH）通过氢键和疏水作用结合；用含乙醇的洗涤去除残留的盐、蛋白质和其他杂质；低盐缓冲液破坏DNA与硅胶膜的结合，洗脱纯净DNA。

【优点】

快速（30分钟内），高通量

纯度高，适合高灵敏度实验（如测序、qPCR）

操作简单，片段适用范围广

【缺点】

成本较高，样本量要求高（微量样本可得率低）

片段长度受限（通常<50kb）<> 

【适用样本】

动物组织、血液（肝脏、肌肉、全血）

细胞

细菌、真菌

四、磁珠法（磁珠吸附法） 

【原理】

使用含离液盐（如盐酸胍）和蛋白酶K的裂解液破坏细胞，释放DNA；加入表面修饰的磁珠（如硅羟基、羧基包被），在高盐条件下，DNA酸骨架与磁珠通过静电作用结合；外加磁场使磁珠吸附至管壁，弃去含杂质的液体；用乙醇洗涤液去除蛋白质、盐等残留物；低盐缓冲液（TE或水）解离DNA，获得高纯度DNA。

【优点】

l 超快速，高通量兼容96孔板大规模筛查

l 无需离心，可减少样本损失

l 高灵敏度，可提取微量DNA 

【缺点】

l 成本高，磁珠易残留

l 不适合长片段研究 

【适用样本】

l 临床检测（血液、血清、唾液、鼻咽拭子等）

l 流行病学筛查、基因分型

l 法医样本（毛发、指纹）、循环肿瘤DNA 

五、CTAB萃取法 

【原理】

CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）缓冲液在高温（65℃）下破坏细胞膜，同时CTAB与DNA结合形成复合物；β-基乙醇（β-ME）还原二硫键，抑制多酚氧化酶活性;加入氯仿-异戊醇离心，CTAB-多糖/蛋白复合物沉淀至有机相，DNA留在水相;水相中加入异丙醇或乙醇，高盐条件下沉淀DNA。 

【优点】

l 高效率去多糖多酚

l 复杂样本DNA得率高，成本低，适合大规模样本处理 

【缺点】

l 操作繁琐，需多次离心和液相转移，易损失

l 试剂具有毒性 

【适用样本】

l 植物组织

l 真菌、酵母

l 古生物样本 

六、酶解法 

【原理】

使用蛋白酶K消化蛋白质，溶菌酶破壁（细菌）；再结合柱纯化或盐析法去除残余蛋白质。 

【优点】

l 条件温和、最大程度保持DNA完整性（适合古DNA提取）

l 高特异性，酶靶向分解特定结构，减少机械剪切风险

【缺点】

l 耗时长（需数小时至过夜消化）

l 成本高，酶试剂价格高

l 酶活性对环境要求高（pH、温度、离子浓度严格控制） 

【适用样本】

l 动物组织、血液

l 真菌、酵母

l 革兰氏阳性菌

l 法医陈旧样本

七、CsCl密度梯度离心法 

【原理】

基于浮力密度差异的超速离心分离技术；穿刺离心管侧壁或底部收集DNA条带，透析去除CSCl。 

【优点】

l 超高纯度，可分离质粒DNA、基因组DNA、RNA及不同构型DNA（闭环/开环/线性），纯度接近100%

l 保留完整性，无化学修饰

l 唯一可分离cccDNA（共价闭合环状DNA）的方法（如质粒、病毒基因组） 

【缺点】

l 极端耗时，超速离心需16~72小时

l 成本昂贵

l 设备要求高 

【适用样本】

l 质粒、病毒

l 基因组

l 线粒体

八、超声波破碎法 

【原理】

超声波破碎细胞释放DNA；需结合其他方法（如柱纯化或磁珠法）去除蛋白质和碎片。 

【优点】

l 适合坚硬细胞壁样本（如革兰氏阳性菌、真菌）

l 可通过调整超声时间、功率控制DNA片段大小

l 避免蛋白酶K或有机溶剂残留，兼容下游敏感实验 

【缺点】

l 过度超声有DNA断裂风险，不适合长片段研究

l 成本高，需要专用超声设备 

【适用样本】

l 革兰氏阳性菌

l 放线菌

l 酵母

九、冻融循环法 

【原理】

温度剧烈变化破坏细胞膜的物理裂解，反复循环可累积破坏效果，最终释放DNA；裂解后的DNA溶于缓冲液（如TriS-EDTA），需结合蛋白酶K或去污剂（如SDS）去除蛋白质。 

【优点】

l 极度温和，可保留超长DNA片段，适合古DNA或基因组研究

l 兼容性强，可与其他方法联用 

【缺点】

l 效率低，对顽固样本需多次循环

l 耗时长，单次循环1~2小时

【适用样本】

l 革兰氏阴性菌

l 细胞

l 藻类、原生动物

l 古生物样本

十、研磨法 

【原理】

样本在液氮（-196°C）中迅速冷冻，使细胞脆化，便于研磨；利用研钵或研磨珠的摩擦、撞击作用，彻底粉碎细胞结构；裂解后的细胞内容物（包括DNA）溶于提取缓冲液（如CTAB或SDS）。 

【优点】

l 裂解顽固样本（植物细胞壁、真菌孢子、革兰氏阳性菌等）

l 无酶、无试剂依赖

l 适用性广，成本低 

【缺点】

l DNA易断裂，不适合长片段研究

l 操作要求高，样本易损失 

【适用样本】

l 植物组织

l 微生物

l 动物组织

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