众所周知，细胞增殖检测方法很多种，比如MTT、CCK8、EdU…等等一大堆，但是这么多的细胞增殖检测方法，怎么选呢？

与传统的免疫荧光染色(BrdU)检测方法相比，EdU只有BrdU抗体大小的1/500，在细胞内更容易扩散，不需要严格的样品变性(酸解、热解、酶解)处理，所以，这种方法不需要繁杂的操作，节约时间，且反应更灵敏和准确。

细胞增殖实验之EdU检测方法操作如下（以 96 孔组织培养板为例）：

细胞增殖实验之EdU检测方法第一步：EdU 来标记细胞

本实验样本是 Hela 细胞，如果使用其它类型的细胞，实验可能需要做调整。建议 EdU 起始浓度是 10 μM，或者根据细胞类型设置几个梯度预实验摸索最佳EdU浓度，再进行正式实验。

1. 培养细胞到合适密度，再进行细胞处理；

2. 用 10 mM EdU 溶液在无血清培养基中制备 2x EdU 工作溶液；

3. 预热 2x EdU 溶液，然后将 2x EdU 溶液添加到等体积含有实验细胞的培养基中，获得 1x EdU 溶液。

4. 将处理好的细胞孵育12小时；

5. 孵育完成；

细胞增殖实验之EdU检测方法第二步：细胞固定和透化

1. 孵育后除去培养基，对含有盖玻片的孔内加入2.5 mL含多聚甲醛的 PBS，室温下孵育15分钟；

2. 除去固定液，用2.5 mL PBS洗涤孔中的细胞5分钟，重复3遍；

3. 除去洗涤液，然后向前五个孔中加入2.5 mL通透液， 室温下孵育20分钟；

4. 除去通透缓冲液，用2.5 mL PBS洗涤每个孔中的细胞两次，除去洗涤液；

细胞增殖实验之EdU检测方法第三步：EdU 检测

1. 制备 Click-iT 反应混合物。配置好的 Click-iT 反应混合物必须在15分钟内使用；

2. 向每个玻片上加入 100 μl Click-iT 反应混合物，室温下避光孵育 30 分钟，在孵育过程中一定要避光；

3. 除去反应混合物，用2.5 mL PBS洗涤每孔一次后，除去洗涤液；

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