肾脏间质纤维化是慢性肾病（CKD）终末期的典型病理改变，纤维化程度越重，肾脏功能就越差。因此，很多肾病课题组都在积极探索减轻肾间质纤维化的药物。

中药在这方面的研究相对较多，还有一些课题组希望开发biomaker来评价纤维化的程度。不论如何，深入研究的前提还是制备肾间质纤维化模型。

1.制备原理

尽管手术入路上存在不同，但是制备方法都是采用单侧输尿管结扎造成梗阻，学名Unilateral Uretera Obstruction，即UUO法。

梗阻后，尿液潴留压迫肾小管，导致肾小管上皮细胞进行性坏死，间质急慢性炎细胞浸润，坏死的肾小管组织逐渐被纤维瘢痕取代，最终形成进行性肾间质纤维化。

（肾脏HE染色）

重要的是在整个病变发生发展过程中，肾小球改变并不明显。这种病理特征用于评价药物的改善作用是很合适的。

2.实验动物

首选大鼠，Wistar或SD都可以。

不推荐使用小鼠。据公认度和各论坛交流经验，即使经验丰富的老手操作，使用小鼠进行UUO法制备模型，死亡率也会很高。同时，小鼠组织太少，如果检测指标较多而动物数又不够，可能会出现组织量不足的情况。

3.手术步骤

（1）大鼠麻醉后仰卧位固定，在左侧腹部中间位置开腹，沿着肾门向下寻找输尿管（像一根白色细线）。

（图中黄色箭头所指为左输尿管）

（2）使用玻璃分针（可减少额外损伤）游离左侧输尿管，在肾盂开口处和输尿管上1/3的位置分别做永久结扎，然后从两个结扎点中间剪断左侧输尿管。

（3）逐层缝合，关腹。一定要逐层，先缝肌肉，再缝皮肤，在扎实缝合的前提下尽量缩短线头。如果你偷懒将肌肉和皮肤一起缝合，大鼠苏醒后会咬开线头，到时肠子什么的都漏出来了。

（4）假手术组大鼠开腹后游离输尿管，但是不结扎，直接关腹。

4.组织病理变化过程

UUO法建立的肾间质纤维化大鼠模型存在一个典型的病理变化：炎症-纤维化。

一般分为术后3-7天、术后14天、术后21天。有一些文献中也会采用术后2、5、9、14天来研究。对于常规的信号通路研究（如炎症通路、纤维化通路）来说，选择正确的时间窗进行干预是很重要的，遗憾地是目前时间窗的选择好像没有统一标准。

术后3-7天，主要病变是肾小管扩张、间质炎细胞浸润、肾小管上皮细胞空泡变，有一些肾小管上皮细胞可能会坏死脱落到管腔中，管型少见。↓

（肾脏PAS染色）

术后14天，主要病变是间质炎细胞浸润加重、近端肾小管结构丢失、远端肾小管扩张，可见管型，间质纤维化也出现了（纤维细胞和成纤维细胞同时存在）。↓

（肾脏HE染色）

（肾脏HE染色）

术后21天，间质炎细胞浸润存在，但不是主要矛盾。主要特征是肾小管结构消失，肾间质纤维化加重。↓

（肾脏Masson染色）

5.病变分析方法

一般而言，UUO法后，采用肾组织HE染色，可通过采用5级法对间质炎症、肾小管扩张、上皮细胞空泡化等病变程度进行分级评价。

评价的主要目标“纤维化”，可以采用Masson染色法，标记胶原纤维，然后采用Image Pro Plus对胶原进行半定量分析。

动物实验外包   想了解更多请关注：https://www.do-gene.cn/