今天在某书上看到一个提问：细胞实验和动物实验哪一个更容易出结果？高赞回答是没良心更容易出结果，果真是这样吗？玩归玩闹归闹，实验还得认真做，今天咱们说说动物取材，辛辛苦苦造了几个月的模型，不能毁在取材这一步，这期先说说肠道取材染色那些事儿。

1

为什么肠组织总被“盯上”？不是只有肠道疾病研究才需要做肠病理！其实很多跨领域课题，都得靠肠组织染色找突破：

• 炎症性肠病（IBD）研究：比如溃疡性结肠炎、克罗恩病，要通过染色看黏膜糜烂、炎症细胞浸润程度；

• 肠道肿瘤研究：像结直肠癌模型，需观察肠黏膜上皮异型增生、肿瘤组织侵犯深度；

• 代谢 / 微生物研究：比如益生菌干预实验，要通过染色判断肠道屏障完整性（毕竟菌群失衡常先伤肠屏障）；

• 药物毒性评价：很多口服药可能损伤肠道，病理染色能直观看到肠绒毛萎缩、黏膜水肿等毒性反应。

简单说，只要你的研究涉及 “肠道结构 / 功能变化”，肠组织病理染色就是绕不开的 “金标准”。

2

小鼠肠结构速览：别把回肠当空肠！大体结构

各段肠组织HE染色

肠组织的四层结构染色结果读不懂，常是因为没摸清肠组织的 “分层逻辑”。小鼠肠道（从十二指肠到直肠）的管壁结构，从内到外分 4 层，每层对应不同的病理指标，一张图帮你理清：

• 黏膜层（最内层）：科研中最关注的一层！包括上皮层（肠绒毛、隐窝组成）、固有层（含血管、淋巴组织）、黏膜肌层。比如肠绒毛变短、隐窝数量减少，常提示肠道损伤；

• 黏膜下层：主要是疏松结缔组织，含神经丛和血管，炎症扩散时这里会出现水肿、炎症细胞聚集；

• 肌层：分内环肌、外纵肌，肠道动力异常时，肌层厚度可能发生改变；

• 浆膜层（最外层）：薄薄一层结缔组织，当肠道炎症严重或肿瘤转移时，浆膜层可能被侵犯。

记住这个分层，后续看染色切片时，就能快速定位 “病变发生在哪一层”，解读指标时更精准。

3

最易踩坑的一步：小鼠肠组织取材 “避坑指南”

很多人染色失败，问题其实出在 “取材第一步”。分享 3 个实验室前辈总结的 “避坑要点”，亲测能减少 80% 的取材失误：

1. 取材时机：别等组织 “自溶”！小鼠处死后，30 分钟内必须完成肠组织取材—— 肠道黏膜对缺氧特别敏感，超时会出现上皮细胞脱落、绒毛溶解（也就是 “自溶”），后续再怎么染都救不回。如果暂时没法处理，先把组织放进 4% 多聚甲醛固定液（体积是组织的 5-10 倍），避免变质。

2. 取材部位：按研究目的 “精准下刀”研究小肠（如吸收功能）：取十二指肠、空肠、回肠各段（每段 1-2cm），注意避开幽门（胃和十二指肠连接部）和回盲瓣（小肠和大肠连接部），这些部位结构特殊，容易干扰结果；研究大肠（如肿瘤、IBD）：取结肠（分升结肠、横结肠、降结肠）或直肠，取材时用生理盐水轻轻冲洗肠腔内容物（别用高压水枪！会冲掉黏膜）；特殊需求：如果研究 “肠道局部病变”（比如肿瘤移植模型），先在体视显微镜下定位病变部位，再用锋利刀片（推荐一次性病理刀片）垂直于肠管纵轴切取，避免组织挤压变形。

3. 固定方法：“平铺固定” 比 “卷起来” 更靠谱很多人习惯把肠组织卷成 “瑞士卷” 固定，其实新手更推荐 “平铺固定”：把肠段剪开（沿肠系膜侧剪开，避免损伤黏膜），展平在滤纸上（黏膜面朝上），再放入固定液，这样能避免黏膜褶皱，后续切片时能完整看到肠绒毛结构。

4

肠组织常见染色及指标解读

1. HE染色——基础中的基础染色效果：细胞核呈蓝色，细胞质、肠绒毛上皮呈粉红色；重点看 3 个指标：① 肠绒毛长度 / 隐窝深度（V/C 比值）：正常小鼠小肠 V/C 比值约 3-5:1，若比值下降（比如绒毛变短、隐窝变深），提示肠道黏膜损伤（常见于炎症、缺血）；② 炎症细胞浸润：固有层或黏膜下层出现大量 “蓝色小点点”（炎症细胞，如中性粒细胞、淋巴细胞），提示肠道炎症；③ 上皮完整性：若上皮层出现 “缺口”（糜烂）或细胞排列紊乱，可能是感染、药物毒性导致。

2. 免疫组化（IHC）——精准定位蛋白紧密连接蛋白（Occludin、ZO-1、Claudin-1）：判断肠屏障是否受损（蛋白表达下降提示屏障破坏）；增殖标志物（Ki-67）：隐窝底部阳性细胞增多提示代偿性修复；炎症细胞：CD3（T细胞）、CD68（巨噬细胞）、Ly6G（中性粒细胞）：量化不同免疫细胞的浸润密度；举个例子：如果你的课题是“益生菌缓解DSS诱导的肠炎”，HE看炎症细胞减少，PAS看杯状细胞恢复，IHC看Occludin表达上调，就能形成完整证据链。

3. PAS染色/AB-PAS染色——盯紧杯状细胞原理：糖原、黏液（杯状细胞分泌）会被染成紫红色。看什么：

• 杯状细胞数量：IBD或感染时，杯状细胞丢失（黏液屏障破坏）；

• 肠道杯状细胞化生（比如在肠化生中，胃黏膜出现杯状细胞）。

4. Masson三色染色：揪出纤维化的“照妖镜”原理：胶原纤维染成蓝色，肌肉/红细胞染成红色。看什么：

• 黏膜下层或肌层是否出现蓝色胶原沉积——这是肠纤维化的标志（常见于慢性IBD或放疗后）。

• 血管壁增厚程度（判断慢性缺血）。

5

科研人闲聊时刻：记得第一次独立做肠取材时，我手抖到差点把小鼠肠子打成蝴蝶结。导师路过幽幽说：“你这肠子，适合做艺术，不适合发SCI。” 其实，失败是科研的常态——染色脱片、切片碎裂、抗体失效……但这些“坑”都在教你细节的重要性。医学之路如同病理切片，每道痕迹都有意义。累了就摸摸鱼（比如看看这篇推文），但别停下，因为那些挑灯夜战的数据，终会成为你论文里的光。

病理实验外包   想了解更多请关注：https://www.do-gene.cn/