细胞自噬染色检测（MDC）是一种利用丹酰尸胺（MDC）作为荧光探针来标记和观察细胞自噬体的方法。细胞自噬是一种细胞内分解代谢途径，可以降解部分自身组分，如多余或异常的细胞器、蛋白质和病原体等。细胞自噬与多种生理和病理过程有关，如生长发育、免疫应答、肿瘤、神经退行性疾病等。

MDC是一种嗜酸性的荧光色素，可以通过离子捕获和与膜脂的特异性结合，从而特异性地标记自噬体，也称为autophagic vacuole。MDC可以发出绿色荧光，可以用紫外光激发，也可以用荧光酶标仪或流式细胞仪进行检测。MDC染色时正常的细胞也会有一定的染色背景，因为很多酸性膜性结构也会被MDC染色。

一． 主要试剂及耗材：

细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)（Solarbio，G0170）

DMEM（Hyclone，SH30023）

FBS（Hyclone，SH30070.03）

青链霉素（Hyclone，SV30010）

胰酶（Hyclone，SH30042.01）

PBS（南京生兴，SN331）

CO2培养箱（Thermo fisher，3131）

Confocal荧光显微镜（Zeiss，LSM710）

二． 实验步骤：

1、MG63及其耐药株培养在含10%胎牛血清的DMEM完全培养基中培养，培养在37℃含5%CO2的细胞培养箱中培养，当细胞增殖至80%-90%时，用胰酶将细胞消化下来，按照1:3比例传代。

2、将1×106个细胞种在3.5cm玻璃底培养皿中，将细胞放入培养箱中培养过夜后，分别加入miR-22、cisplatin、cisplatin和miR-22后，将细胞放入培养箱中培养12h、24h。 3、将细胞从培养箱中取出，去除培养基，用300～400μl的1×Wash buffer清洗细胞1次，弃上清。

4、加入适量MDC Stain，轻轻混匀。

5、室温避光染色15～45min。

6、用300～400μl的1×Wash buffer清洗细胞2次，弃上清。

7、加入100μl的Collection buffer重悬细胞，滴加于载玻片上并加盖玻片。

8、荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm)，拍照。

文章发布于：细胞实验外包    想了解更多请关注：http://www.do-gene.cn