蛋白Marker定义和用途蛋白Marker：即蛋白分子量标准，是一些已知分子量的蛋白质的混合物，像“尺子”一样用来指示蛋白质条带的大小。在Western Blot过程中，分子量Marker就像个螺丝钉一样虽然是其中小小的一环，然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。Marker的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小

细胞衰老模型建立实验流程一、实验材料准备1. 细胞系：选择易于培养且具有明确衰老特征的细胞，如人胚肺成纤维细胞（MRC-5）、HEK293、HUVEC等。2. 试剂：- 基础培养基（如DMEM、MEM）、胎牛血清（FBS）、青霉素-链霉素双抗。- 衰老诱导试剂：- 复制性衰老：持续传代培养。- 药物诱导衰老：D-半乳糖（100-500 mM）、阿霉素（

LPS诱导细胞炎症模型建立实验流程脂多糖（LPS）诱导细胞炎症模型常用于炎症相关的细胞生物学研究。下面以常用的RAW264.7巨噬细胞为例，介绍其实验流程：实验准备1. 细胞：RAW264.7巨噬细胞。2. 试剂：LPS、细胞培养基（如DMEM）、胎牛血清（FBS）、青霉素-链霉素双抗、胰蛋白酶、PBS缓冲液、CCK-8试剂、ELISA试剂盒（检测炎

问题一：无信号/荧光强度弱1.信号补偿不正确建议：检查流式细胞仪上单色阳性对照是否设置正确，通道和补偿设置是否能正确地捕获所有事件2.用于检测的抗体不足建议：增加抗体量/浓度3.无法接近细胞内靶标建议：检查靶蛋白是否在细胞内;对于胞内染色，确保有足够的透化作用;为防止细胞表面蛋白

一、苯酚-氯仿提取法（有机溶剂法）【原理】使用SDS（十二烷基硫酸钠）或蛋白酶K破坏细胞膜/核膜，释放DNA和蛋白质；加入苯酚-氯仿-异戊醇混合液使蛋白质变性（酚溶解蛋白质，氯仿增强相分离，异戊醇减少气泡）；离心后DNA保留在水相中，吸取水相，加入冷乙醇或异丙醇沉淀DNA，离心后获得DNA沉淀。【优点】l成本低，适

一、四甲基乙二胺（TEMED）【用途】作为聚丙烯酰胺凝胶聚合的催化剂，与过硫酸铵(APS)共同促进凝胶形成。【危害】挥发性强，有强烈刺激性气味，可腐蚀呼吸道、眼睛和皮肤；长期暴露可能导致神经毒性，影响记忆力。【防护措施】必须在通风橱中操作，减少吸入风险；佩戴防毒面具、护目镜和耐化学腐蚀手套；实验后彻底清